维生素预混料中维生素B12的测定

1 范 围
本标准规定了 用 液 相色谱法测定 维生素预混料中维生素 B 1 2 的 方法。
本 标 准 适用 于 维 生素 预 混 料、维生素B , z 预混制剂中维生素B , z 的测定。 检测范围为每 千 克样 品 中 维
生 素B , 含 量 大 于 。 . 2 5  m g ,
方法原理
试样中 维生素B用 水 提 取， 经 液相 色 谱 反 相 柱 分 离， 其峰面积与维生素B , 。 的 含 量成正 比
试剂 和材料
本标准所用试 剂除特殊注明 外 ， 均为 优级纯， 水为 去离子水。
11 乙睛: 色 谱纯。
3 . 2 正磷 酸溶 液
3 .  3  2 5 %乙 醇溶液
3 . 4 维生素B , 标 准 溶 液。
3 . 4 .  1 维 生 素B 。 标 准 贮 备 溶 液: 准 确 称 取 。 . 1 0 0 0 g 维 生 素B , : 纯 品 （ 符 合U S P ）  , 溶 解 于 1 0 0  M I 乙 醇
溶 液（ 3 . 3 ） 中 ， 并 稀 释 定 容 至 刻 度， 摇匀 。 该 标 准 贮 备 液 每 毫 升 含 维 生 素B , , I  m g .
3 . 4 . 2 维 生 素B ,  z 标 准 工 作 液: 准 确 吸 取 维 生 素B , z 标 准 贮 备 液（ 3 .  4 .  1 ） 1  m L 于 5 0  M I 容 量 瓶 中 ， 用 移
动 相 稀 释 定 容 刻 度， 摇 匀。 该 标 准 工 作 液 1  M I 含 维 生 素B V 2  （ A g e
4 仪器、 设备
4 . 1 实验室 常用 设备。
4 . 2 超声波水浴 。
4 . 3 液相色谱仪 ， 带动进样器， 紫外可调波长检测器。
4 . 4 超纯水装置
4 . 5 离心机: 3  0 0 0  r / m i n .
5 试 样制备
取 具 有 代 表 性 样 品 至 少 5 0 0  g ， 用 四 分 法 缩 分 至 1 0 0  g ， 粉 碎 · 圣 部 过 0 .  2 8  m m 孔 卜 混 匀 ， 装 入 样 品
瓶内 密闭， 避光低 温保存备用。
6 分析步骤
6 . 1 提 取
6 . 1 . 1 维生素 预混料中 维生素 B 。 的提取
称 取 试 样 2 ^ - 3  g （ 精 确 至 士 。 .  0 0 0  1  g  ） ， 置 于 1 0 0  m L 棕 色 容 量 瓶 中 ， 加 约 6 0  m L 去 离 子 水， 在 超 声
波水 浴中 超声 提 取 1 5  m i n ， 取出 ， 用 去 离 子水 定 容至 刻 度， 混 匀， 过滤， 滤液 过 。 . 4 5  f a m滤膜， 供高 效 液
相色 谱仪分析。
6 . 1 . 2 维 生 素B 二 制 剂 （ 1 % - 2 % ） 的 提 取
称 取 试 样 1  g （ 精 确 至 士 。 0 0 0  1  g ） 于 1 0 0  m L 棕 色 容 量 瓶中 ， 加 人 约 6 0  m L 去 离 子 水， 在 超 声 波 水
浴中 超 声 提 取 1 0  m i n ， 取出 用 去 离 子水 定容 过 滤。 精 确吸 取 1 .  0 0  m L 溶 液于 5 0  m L 棕色 容 量瓶中， 用 去
离 子 水 定 容 至 刻 度， 该 液 通 过 。 . 4 5  p m滤 膜过 滤， 供 高 效液 相 色 谱 仪 分 析
6 . 2 测 定步骤
6 . 2 . 1 色谱条件
柱 子: p . - B o n d p a k  N H , , 粒 度 5  p m , 3 . 9  m m  X 3 0 0  m m .
柱温: 3 0  C 。
流 动 相: 3 % 正 磷酸 水 溶 液 2 6 0  m L 与 7 0 0  m L 乙 膀 混合， 超 声 脱 气。
流 速: 1 .  7  m L / m i n ,
检 测 波 长: 3 6 1  n m ,
6 . 2 . 2 定量测 定
按液相色谱仪说明 书 调整 仪器 操 作 参 数， 用 两 次以 上 相应 标 准 工 作液， 对 系 统 进行 校 正。
将 通 过 。 . 4 5  p = 滤 膜的 样 液 （ 6 . 1 . 1 ） 依 次 分 装 于自 动 进 样 小 瓶 中 ， 依 外 标 法 上 液 相 色 谱 仪 测 定
6 . 2 . 3 也 可 采 用 反 相 离子 对 高 效液 相 色 谱 测 定 维 生 素 B , , 的 方 法（ 见 附 录 A ）
7 测定结果的计算
M i l 定结果按式（ 1 ） 计算
m;=
P ; X V  X  p ; X V �
尸 。 ， X 舰 X V
· · · · · 。 . · · · · · · · · . · · · · 。 . · · · · 一 （1）
式中: . ; 一 一 每 千克 样品 中 维生 素 B , : 的 含 量， m g ;
m - 一 试 样 质 量， g +
V ; - 一 试 样 溶 液 进 样 体 积, p L ;
尸 . - 一 试样 溶 液 峰面 积 值;
V - 一 试样稀 释的 体积， m L ;
P - 一 标 准 溶 液 浓 度， p g / m L  ;
v ， - 一 标 准 溶液 进 样 体 积, p L ;
P , - 一 标 准 溶 液 峰 面 积 平 均 值。
每 个 试 样 取 两 份 试 料 进 行 平 行 测 定， 以 其 算 术 平 均 值为 测 定 结 果 。 结 果 表 示 到 每 千 克 样 品 中 维 生 素
B , , O .  0 1  m g
8 允许差
同 一 分析 者对同一 试样同 时 两次平行测定结果的 相对偏差应不大于1 5 %。（色谱仪器网）